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        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用(1)

        日期: 2017-07-24
        浏览次数: 1819
        案例名称: 荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用(1)

        摘要:?维生素B2又名核黄素bbin体育bbin体育,在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品,其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。检测其含量也有着许多的方法,其中荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法bbin体育,它是维生素B2含量测定的一个比较常用的方法bbin体育。

        本文以测定多维片中维生素B2(核黄素)元素含量为例,依据GB/T 5009.85-2003《食品中核黄素(维生素B2)的测定》,应用港东F-380型荧光分光光度计对多维片中维生素B2含量进行测定。结果证明此方法操作简便,线性良好是测定多维片中维生素B2含量的理想方法。



        关键词:荧光分光光度法 ?维生素B2核黄素 ?多维片


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        · 原理

        核黄素在 440nm~500nm 波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。在波长 525nm 下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na 2 S 2 O 4 )bbin体育,将核黄素还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度bbin体育,两者之差即为多维片中核黄素所产生的荧光强度。

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        ·?实验条件

        1bbin体育、仪器及附件:

        天津港东 F-380 型荧光分光光度计

        荧光石英比色皿

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        2bbin体育bbin体育、分析条件:?

        ? ? 激发波长:440nm

        ? ??发射波长:525nm

        ?

        3bbin体育、药品:

        ? ??硅镁吸附剂(60~100 目)、乙酸钠、木瓜蛋白酶、淀粉酶bbin体育、盐酸、氢氧化钠、低亚

        ? ??硫酸钠(Na 2 S 2 O 4 )、洗脱液(丙酮bbin体育、冰乙酸、水)、高锰酸钾bbin体育、过氧化氢、核黄素标准溶液(纯度 98%)等。

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        4bbin体育、其他:

        电热恒温培养箱、高压消毒锅bbin体育、分析天平(0.0001g)、容量瓶bbin体育、盐基交换柱bbin体育、三角瓶bbin体育bbin体育、瓷坩埚bbin体育bbin体育、移液管、刻度试管、具塞比色管、试管架、擦镜纸、滴管、量筒bbin体育、磁力搅拌器、pH 计等。


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        ·?样品及标准样品处理

        ? ? 特别注意:整个操作过程需避光进行

        1、样品溶液的制备

        (1)样品提取

        ? ? ① 水解

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用


        ? ???② 酶解

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

        ? ??③ 过滤

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用


        (2)氧化去杂质

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

        (3)核黄素的吸附和洗脱

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

        2、标准溶液的制备

        (1)核黄素标准储备液(25μg/mL):

        ? ? 将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中bbin体育。经过 24 小时后bbin体育,

        ? ??准确称取精确称取 50mg,置于 2L 容量瓶中,加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。将容量瓶置

        ? ??于温水中摇动bbin体育,待其溶解,冷至室温,稀释至 2L,移至棕色瓶内,加少许甲苯盖于溶液表面,于冰箱中避光保存。

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        (2)核黄素标准使用液(1μg/mL)

        吸取 2.00mL 核黄素标准储备液(25μg/mL)bbin体育,置于 50mL 棕色容量瓶中,用水稀释至

        刻度bbin体育。避光bbin体育,贮存于 4℃冰箱,可保存一周bbin体育。


        3bbin体育、空白溶液

        待测试样及标准的荧光值测量后,在各管的剩余液(约 5~7mL)中加入 0.1mL20%的低亚硫酸钠溶液(Na 2 S 2 O 4 ),立即混匀,在 20s 内测出各管的荧光值,作为各自的空白值。


        ·?测定结果

        应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“波长扫描”???bbin体育,分别读取待测溶液荧光强度,根据计算公式得到样品维生素B 2 的含量。


        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

        荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

        ·?测定结果

        应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“光度测定”??閎bin体育,分别读取待测溶液的荧光强度,根据计算公式得到样品维生素B2的含量。

        ?

        ·?结论

        采用荧光分光光度法测定多维片中维生素B2含量bbin体育,操作简单,方法准确,是一种理想的方法。

        由于维生素B2待测液遇光不稳定,因此实验对仪器的功能要求高。港东 F-380 型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置,从而避免了样品被强光的直接照射,使整个实验操作简便,结果重现性良好。



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